Проточная цитометрия - современный метод диагностики нарушений иммунитета
Е.В. Тихонова, зав.лабораторией ОЦ СПИД.
В настоящее время проточная цитометрия является наилучшим методом выявления поверхностных маркеров клеточной мембраны. Этот метод имеет целый ряд преимуществ, по сравнению с другими способами определения популяций лимфоцитов.
Необходимо отметить, что преимущества проточной цитометрии нивелируют все ее недостатки, в том числе и высокую стоимость.
Таких характеристик, как высокая скорость выполнения исследования - 1000 клеток в секунду, высокая чувствительность, возможность анализировать малые объемы клеток и несколько популяций одновременно, сортировка клеток, не имеют другие методы, применяемые для решения вышеперечисленных задач.
На сегодняшний день проточная цитометрия - ведущий метод в клинической иммунологии. В клинической практике он может быть использован для решения следующих задач:
- иммунофенотипирования острых лейкозов и лимфом;
- анализа клеточного цикла (ДНК-цитометрия);
- иммунофенотипирования лимфоцитов;
- анализа процессов клеточной активации и процессов пролиферации клеток иммунной системы.
Мировыми лидерами в производстве проточно-цитометрического оборудования являются американские фирмы "Beckman Coulter" и "Becton Dickinson". Эти же фирмы занимаются производством антител для типирования клеток.
Производительность клеточных цитофлуориметров составляет 60 образцов в час и лимитируется в основном только временем приготовления клеток.
Аппаратура для проточной цитометрии постоянно совершенствуется. В настоящее время разработки идут по пути создания более удобных для пользователей приборов, позволяющих повысить производительность анализов, пользоваться аппаратурой менее квалифицированному персоналу. Проточные цитофлуориметры последнего поколения дают возможность проводить клеточные исследования так же легко и быстро, как рутинные клинические анализы крови.
Области использования проточной цитометрии:
1. Иммунология:
- исследование иммунного статуса;
2. Онкология:
- определение специфических маркеров, что позволяет проводить наблюдение пациентов, входящих в группу риска;
3. Цитология:
- определение цитоморфологической принадлежности клетки;
- оценка активности внутриклеточных ферментов, определение экспрессии поверхностных антигенов, анализ стадий клеточного цикла;
4. Гематология:
- анализ субпопуляционного состава клеток периферической крови
5. Фармакология:
- изучение механизмов воздействия различных биологически активных веществ на клеточном уровне, в том числе иммуномодуляторов.
Проточная цитометрия при диагностике онкогематологических заболеваний позволяет определить:
- линейную принадлежность опухолевых клеток;
- степень дифференцировки и гетерогенности клеточной популяции;
- количество стволовых клеток;
- плоидность популяции злокачественных клеток.
Для того, чтобы качественно оценить результаты исследований, должны быть выполнены общепринятые лабораторные критерии: точность, достоверность, надежность, воспроизводимость и быстрота.
Всем этим требованиям отвечает один из самых современных методов в лабораторной диагностике - проточная цитометрия.
